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Agerafenib (CEP-32496) Raf inhibiteur

Réf. CatalogueS8015

Agerafenib (CEP-32496) est un inhibiteur très puissant de BRAF(V600E/WT) et de c-Raf avec un Kd de 14 nM/36 nM et 39 nM, respectivement. Il montre également une activité puissante contre Abl-1, c-Kit, Ret (c-Ret), PDGFRβ et VEGFR2, mais a une affinité insignifiante pour MEK-1, MEK-2, ERK-1 et ERK-2. Ce composé est actuellement en essais cliniques de phase 1/2.
Agerafenib (CEP-32496) Raf inhibiteur Chemical Structure

Structure chimique

Poids moléculaire: 517.46

Aller à

Contrôle Qualité

Lot : S801501 DMSO]9 mg/mL]false]Water]Insoluble]false]Ethanol]Insoluble]false Pureté : 99.19%
99.19

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires Type dessai Concentration Temps dincubation Formulation Description de lactivité PMID
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of LCK in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.002μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of PDGFRbeta in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.002μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of cKit in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.002μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of Ret in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.002μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of Abl1 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.003μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of VEGFR2 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.008μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of CSF1R in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.009μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of EPHA2 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.014μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of BRAF V600E mutant in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.014μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of EGFR in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.022μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of wild type BRAF in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.036μM. 22168626
COLO205 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human COLO205 cells expressing BRAF V600E mutant after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=0.036μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of CRAF in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.039μM. 22168626
A375 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human A375 cells expressing BRAF V600E mutant after 72 hrs by cell titer blue assay, IC50=0.078μM. 22168626
A375 Function assay 2 hrs Inhibition of BRAF V600E mutant-mediated MEK phosphorylation in human A375 cells after 2 hrs, IC50=0.082μM. 22168626
HCC827 Function assay Displacement of [3H]-cyclopamine from SMO V404M mutant in gefitinib resistant human HCC827 cells by scintillation counting, Ki=0.1878μM. 28787156
COLO679 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human COLO679 cells expressing BRAF V600E mutant after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=0.211μM. 22168626
HT144 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human HT144 cells expressing BRAF V600E mutant after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=0.228μM. 22168626
SK-MEL-28 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human SK-MEL-28 cells expressing BRAF V600E mutant after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=0.454μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of cMET in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=0.513μM. 22168626
HCT116 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human HCT116 cells expressing wild type BRAF after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=0.669μM. 22168626
Hs578T Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human Hs578T cells expressing wild type BRAF after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=2.736μM. 22168626
DU145 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human DU145 cells expressing wild type BRAF after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=2.911μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of JAK2 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=4.7μM. 22168626
PC3 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human PC3 cells expressing wild type BRAF after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=6.257μM. 22168626
LNCAP Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human LNCAP cells expressing wild type BRAF after 72 hrs by cell titer blue assay, EC50=6.631μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of MEK1 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=7.1μM. 22168626
HEK293 Function assay 1 hr Inhibition of MEK2 in human HEK293 cells after 1 hr by competition binding assay, Kd=8.3μM. 22168626
COLO205 Antitumor assay 10 mg/kg 14 days Antitumor activity against human COLO205 cells xenografted in athymic nude mouse at 10 mg/kg, po bid for 14 days 22168626
COLO205 Antitumor assay 30 mg/kg 14 days Antitumor activity against human COLO205 cells xenografted in athymic nude mouse at 30 mg/kg, po bid for 14 days 22168626
COLO205 Antitumor assay 100 mg/kg 14 days Antitumor activity against human COLO205 cells xenografted in athymic nude mouse at 100 mg/kg, po bid for 14 days 22168626
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire 517.46 Formule

C24H22F3N5O5

 Stockage (À compter de la date de réception)
N° CAS 1188910-76-0 Télécharger le SDF Stockage des solutions mères

Synonymes RXDX-105 Smiles CC(C)(C1=CC(=NO1)NC(=O)NC2=CC(=CC=C2)OC3=NC=NC4=CC(=C(C=C43)OC)OC)C(F)(F)F

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 9 mg/mL (17.39 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse Concentration Volume Poids moléculaire
Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo
Lot:

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

mg/kg g μL

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH2O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de lajout précédent, est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Caractéristiques
High binding affinity for both BRAF (V600E) mutation and related c-Raf, but no significant affinity for other kinases of MAPK pathway.
Targets/IC50/Ki
c-Kit
2 nM(Kd)
LCK
2 nM(Kd)
PDGFRβ
2 nM(Kd)
RET
2 nM(Kd)
Abl1
3 nM(Kd)
VEGFR2
8 nM(Kd)
CSF-1R
9 nM(Kd)
B-Raf (V600E)
14 nM(Kd)
EphA2
14 nM(Kd)
EGFR
22 nM(Kd)
B-Raf
36 nM(Kd)
C-Raf
39 nM(Kd)
c-Met
513 nM(Kd)
In vitro
Agerafenib (CEP-32496) inhibe la prolifération des cellules A375 (BRAFV600E) avec une CE50 de 78 nM. Il présente une cytotoxicité plus sensible pour les lignées cellulaires tumorales (A375, SK-MEL-28, Colo-205, Colo-679 et HT-144) exprimant le BRAF mutant que celles exprimant le BRAF de type sauvage (HCT116, Hs578T, LNCaP, DU145 et PC-3). Ce composé inhibe la phosphorylation de la protéine kinase activée par les mitogènes (MAP)/kinase régulée par le signal extracellulaire (ER) (MEK) (pMEK) dans les lignées cellulaires de mélanome humain (A375) et de cancer colorectal (Colo-205) avec des valeurs d'IC50 de 78 nM et 60 nM, respectivement.
Essai kinase
Essai de liaison
Les kinases sont produites et affichées sur le phage T7 ou par expression dans les cellules HEK-293 et ​​marquées avec de l'ADN. Les réactions de liaison sont effectuées à température ambiante pendant 1 heure, et la fraction de kinase non liée au composé test est déterminée par capture avec un ligand d'affinité immobilisé et quantification par PCR quantitative. Chaque kinase est testée individuellement contre Agerafenib (CEP-32496). Les valeurs de Kd pour ce composé sont déterminées en utilisant onze dilutions en série de 3 fois et présentées comme des valeurs moyennes d'expériences réalisées en double. La variabilité entre les valeurs individuelles est inférieure à 2 fois.
In vivo
Agerafenib (CEP-32496) présente une bonne stabilité dans les préparations microsomales hépatiques de souris, de chien, de singe et d'homme avec des valeurs de clairance intrinsèque mesurées de <23 (μL/min)/mg et un t1/2 > 60 min dans tous les essais. Ce composé (30 mg/kg, par voie orale, BID) présente une stase tumorale et une incidence de 40 % de régressions tumorales partielles (PR) dans le modèle de xénogreffe de souris Colo-205, tandis que le groupe de dose de 100 mg/kg présente à la fois une stase tumorale et une incidence de 80 % de PR. Il (30 mg/kg, par voie orale, BID) entraîne une inhibition de 50 % et 75 % du pMEK normalisé dans les lysats tumoraux aux points de temps de 2 heures et 6 heures après la dose, respectivement, tandis qu'une dose de 55 mg/kg entraîne une inhibition de 75 % à 57 % du pMEK de 2 heures à 10 heures après l'administration dans le modèle de xénogreffe de souris Colo-205. Il est biodisponible par voie orale chez plusieurs espèces précliniques (>95 % chez les rats, les chiens et les singes). Ce composé (100 mg/kg) entraîne une inhibition du pMEK et du pERK et une stase et des régressions tumorales durables dans les xénogreffes de carcinome du côlon BRAF(V600E) chez des souris nues.
Références

Applications

Méthodes Biomarqueurs Images PMID
Growth inhibition assay Cell viability
S8015-viability1
31695841
Western blot p-RET / RET / p-PLCγ / PLCγ / p-ERK / ERK / p-MEK / MEK
S8015-WB1
28011461

Support technique

Instructions de manipulation

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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