Golvatinib (E7050) c-Met inhibiteur

Des études in vitro indiquent que le Golvatinib (E7050) inhibe puissamment la phosphorylation de c-Met et de VEGFR-2. Il réprime également puissamment la croissance des cellules tumorales amplifiées en c-Met et des cellules endothéliales stimulées par le HGF ou le VEGF. [1] Ce composé contourne la résistance à tous les EGFR-TKIs réversibles, irréversibles et sélectifs des mutants induite par le HGF exogène et/ou endogène dans les lignées cellulaires de cancer du poumon mutantes EGFR, en bloquant la voie Met/Gab1/PI3K/Akt in vitro. Il prévient également l'émergence de cellules HCC827 résistantes au géfitinib induite par une exposition continue au HGF. [2]

Analyse par Western blot

Le statut de phosphorylation de c-Met et VEGFR-2 est détecté par analyse Western blot. Pour c-Met, les cellules MKN45 sont incubées avec une dilution en série de Golvatinib (E7050) dans un milieu complet à 37 °C pendant 2 h. Pour VEGFR-2, les HUVEC sont privées de sérum dans un milieu sans sérum endothélial humain contenant 0,5 % de FBS pendant 24 h. Ensuite, les HUVEC sont incubées avec une dilution en série de ce composé pendant 1 h, puis incubées avec 20 ng/mL de VEGF humain pendant 5 min. Les cellules sont lysées par un tampon de lyse (50 mM HEPES [pH 7,4], 150 mM NaCl, 10 % glycérol, 1 % Triton X-100, 1,5 mM MgCl₂, 1 mM EDTA [pH 8,0], 100 mM NaF, 1 mM phénylméthylsulfonylfluorure, 1 mM orthovanadate de sodium, 10 μg/mL aprotinine, 50 μg/mL leupeptine et 1 μg/mL pepstatine A). Les échantillons tumoraux réséqués sont homogénéisés avec un tampon de lyse contenant 25 mM de β-glycérophosphate et 0,5 % (v/v) de cocktail inhibiteur de phosphatase 2 à 4 °C. Les débris cellulaires sont éliminés par centrifugation à 17 860 g pendant 20 min à 4 °C. Des aliquotes des surnageants contenant 5-20 μg de protéines sont soumises à une SDS-PAGE dans des conditions réductrices. Les protéines sont ensuite transférées sur des membranes PVDF, bloquées avec du TBS contenant 0,05 % de Tween-20 et soit 5 % de lait écrémé, soit 5 % de BSA. Les membranes sont sondées avec les anticorps suivants : anticorps polyclonal anti-c-Met (C-28) et anticorps polyclonal anti-VEGFR-2 (C-20) ; anticorps monoclonal anti-phosphotyrosine clone 4G10 ; et anticorps polyclonal anti-VEGFR-2, anticorps polyclonal anti-phospho-VEGFR-2 (Tyr996) et anticorps polyclonal anti-phospho-c-Met (Tyr1234/1235). La détection est réalisée à l'aide d'un kit de chimiluminescence amélioré Super Signal. Les bandes immunoréactives sont visualisées par chimiluminescence avec un système de détection Image Master-VDS-CL. L'intensité de chaque bande est mesurée à l'aide d'un analyseur d'images.

Le Golvatinib (E7050) montre une inhibition de la phosphorylation de c-Met et VEGFR-2 dans les tumeurs in vivo, avec une forte suppression de la croissance tumorale et de l'angiogenèse dans les modèles de xénogreffes. Le traitement de certaines lignées tumorales contenant des amplifications de c-Met avec des doses élevées de ce composé (50–200 mg/kg) induit une régression tumorale et une disparition. Dans un modèle de dissémination péritonéale, il démontre un effet antitumoral contre les tumeurs péritonéales ainsi qu'une prolongation significative de la durée de vie chez les souris traitées. [1] Dans une autre étude de xénogreffe, les tumeurs produites par des cellules Ma-1 transfectées par le HGF (Ma-1/HGF) sont plus angiogéniques que les tumeurs du groupe témoin vectoriel et montrent une résistance au ZD1839. L'E7050 seul inhibe l'angiogenèse et retarde la croissance des tumeurs Ma-1/HGF, et lorsqu'il est combiné au ZD1839, il induit une régression marquée de la croissance tumorale. [3]