TAK-285 EGFR inhibiteur

Parmi les 34 kinases testées, TAK-285 n'inhibe significativement que HER4 avec une IC50 de 260 nM, inhibe légèrement MEK1, MEK5, c-Met, Aurora B, Lck, CSK et Lyn B avec une IC50 de 1,1 μM, 5,7 μM, 4,2 μM, 1,7 μM, 2,4 μM, 4,7 μM et 5,2 μM, respectivement, et ne montre aucune activité contre d'autres kinases avec une IC50 de >10 μM. Ce composé montre une activité inhibitrice de croissance significative contre les cellules BT-474 (lignée de cellules de cancer du sein humain surexprimant HER2) avec une GI50 de 17 nM. [1] Comparé à SYR127063, un puissant inhibiteur de HER2, il présente une puissance in vitro similaire contre HER2 et EGFR. Comparé aux domaines cytoplasmiques complets des protéines de type sauvage, les mutations et les limites raccourcies utilisées pour la détermination de la structure de HER2-KD et EGFR-KD ne modifient pas significativement l'activité inhibitrice (IC50) de ce produit chimique. Il se lie à la conformation inactive de l'EGFR et montre un mode de liaison similaire à celui du lapatinib dans le site actif. [2]

Test des kinases HER2 et EGFR

Le domaine cytoplasmique (acides aminés 676-1255) de HER2 humain et le domaine cytoplasmique (acides aminés 669-1210) d'EGFR humain sont exprimés sous forme de protéine marquée par un peptide N-terminal (DYKDDDD) à l'aide d'un système d'expression par baculovirus. Les kinases HER2 et EGFR exprimées sont purifiées par gel d'affinité anti-FLAG M2. Les tests des kinases EGFR et HER2 sont réalisés à l'aide d'ATP radiomarqué [γ-³²P] dans des plaques à 96 puits. Les réactions de kinase sont effectuées dans 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM MnCl₂, 0,01 % Tween 20 et 2 mM DTT contenant 0,9 μCi de [γ-³²P]ATP par réaction, 50 μM ATP, 5 μg/mL de poly(Glu)-Tyr (4:1), et chaque domaine cytoplasmique purifié (0,25 μg/mL d'EGFR ou de HER2) dans un volume total de 50 μL. Pour mesurer la valeur IC50 de l'inhibition enzymatique, des concentrations croissantes de ce composé sont incubées avec l'enzyme pendant 5 minutes avant la réaction à température ambiante. Les réactions de kinase sont initiées par l'ajout d'ATP. Après 10 minutes à température ambiante, les réactions sont arrêtées par l'ajout de 10 % (concentration finale) d'acide trichloracétique. Les protéines phosphorylées par γ-³²P sont filtrées dans une plaque de récolte à l'aide d'un collecteur de cellules et lavées pour éliminer le [γ-³²P]ATP avec 3 % d'acide phosphorique. Les plaques sont séchées, puis 25 μL de MicroScint0 sont ajoutés. La radioactivité est comptée par un compteur à scintillation TopCount. Les valeurs IC50 sont calculées par analyse de régression non linéaire des pourcentages d'inhibition.

La biodisponibilité orale de TAK-285 est de 97,7 % chez les rats et de 72,2 % chez les souris à une dose de 50 mg/kg. L'administration orale de ce composé à 100 mg/kg deux fois par jour pendant 14 jours montre une efficacité antitumorale significative dans le modèle de xénogreffe tumorale BT-474 (surexprimant HER2) chez la souris avec un rapport tumeur/contrôle (T/C) de 29 %, sans affecter le poids corporel. Similaire au modèle BT-474, ce composé présente une inhibition dose-dépendante de la croissance tumorale des xénogreffes 4-1ST (tumeur gastrique humaine surexprimant HER2) chez les souris, avec un T/C de 44 % et 11 % aux doses de 50 mg/kg et 100 mg/kg, deux fois par jour, respectivement, sans perte de poids corporel significative chez les souris. De plus, ce traitement chimique induit une inhibition de croissance dose-dépendante des tumeurs 4-1ST chez les rats avec un T/C de 38 % et 14 % aux doses de 6,25 mg/kg et 12,5 mg/kg, et, particulièrement remarquable, une régression tumorale avec un T/C de -12 % et -16 % aux doses de 25 mg/kg et 50 mg/kg, respectivement. [1] Après administration orale de ce composé, une quantité significative de ce composé est présente dans le cerveau des rats sous une forme non liée pharmacologiquement active (environ 20 % de son niveau plasmatique libre), indiquant que ce composé a un potentiel dans la thérapie des malignités/métastases du SNC. [3]