Name: Pelitinib (EKB-569)
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S1392
Rating: 5 (11 reviews)

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Contrôle Qualité

Lot : Pureté : 99.49%

99.49

Cibles apparentées	VEGFR PDGFR FGFR c-Met Src MEK CSF-1R FLT3 HER2 c-Kit
Autre EGFR Inhibiteurs	Lazertinib (YH25448) Icotinib Hydrochloride Sunvozertinib AG-490 AG-1478 Canertinib (CI-1033) WZ4002 Rociletinib (CO-1686) Poziotinib (NOV120101, HM781-36B) Genistein

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires	Type dessai	Temps dincubation	Description de lactivité	PMID
A431	Function assay		Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM.	20797871
Sf9	Function assay	10 mins	Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM.	30600149
A431	Function assay	90 mins	Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM.	30973735
DiFi	Function assay	2 hrs	Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM.	17689836
UCH1	Antiproliferative assay	72 hrs	Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM.	30973735
UCH2	Antiproliferative assay	72 hrs	Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM.	30973735
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire	467.92	Formule	C₂₄H₂₃ClFN₅O₂	Stockage (À compter de la date de réception)	3 ans-20°Cpoudre
N° CAS	257933-82-7	Télécharger le SDF		Stockage des solutions mères	1 an-80°Cen solvant 1 mois-20°Cen solvant
Synonymes	N/A			Smiles	CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse	Concentration	Volume	Poids moléculaire
=	×	×

Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo Lot:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.650mg/ml (1.39mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.650mg/ml (1.39mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

Dosage : mg/kg Poids moyen des animaux : g Volume de dosage par animal :μL Nombre danimaux :

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH₂O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de lajout précédent, est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Caractéristiques	An improved version of EKI-785.
Targets/IC₅₀/Ki	EGFR 38.5 nM Src 282 nM MEK/ERK 800 nM ErbB2 1.255 μM Raf 3.353 μM
In vitro	Le Pelitinib (EKB-569) présente une activité inhibitrice beaucoup plus élevée contre l'EGFR, comparé au c-erbB-2 étroitement apparenté, ainsi qu'à d'autres kinases telles que Src, Cdk4, c-Met, Raf et MEK/ERK, avec une IC50 allant de 282 nM pour Src à >20 μM pour Cdk4. En conséquence, le traitement par ce composé inhibe significativement l'autophosphorylation de l'EGFR mais pas du c-Met dans les cellules A431. Il inhibe puissamment la prolifération des kératinocytes humains normaux (NHEK), ainsi que des cellules tumorales A431 et MDA-468 avec des IC50 de 61 nM, 125 nM et 260 nM, respectivement, tout en présentant peu d'activité contre les cellules MCF-7 avec une IC50 de 3,6 μM. Ce produit chimique inhibe la phosphorylation de l'EGFR induite par l'EGF dans les cellules A431 et NHEK avec une IC50 de 20-80 nM, ainsi que la phosphorylation de STAT3 avec une IC50 de 30-70 nM. À 75-500 nM, il inhibe également spécifiquement l'activation d'AKT et d'ERK1/2, sans affecter la voie NF-κB. Dans les cellules NHEK, ce composé inhibe également puissamment l'activation de l'EGFR médiée par le TGF-α avec une IC50 de 56 nM, ainsi que l'activation de STAT3 et d'ERK1/2 avec des IC50 respectives de 60 nM et 62 nM.
Essai kinase	Autophosphorylation de l'EGFR dans les cellules
Essai kinase	Pour les expériences utilisant des cellules en culture, les cellules A431 sont traitées avec diverses concentrations de Pelitinib (EKB-569) pendant 2,75 heures avant une co-incubation avec 100 ng/mL d'EGF pendant 0,25 heure. Les cellules sont lavées deux fois avec du phosphate-buffered saline (PBS) froid avant d'être ajoutées au tampon de lyse (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% désoxycholate de sodium, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatin A, 10 mg/mL leupeptine, 20 KIU/mL aprotinine, 2 mM orthovanadate de sodium et 100 mM fluorure de sodium) pendant 20 minutes sur glace, avant immunoprécipitation et SDS-PAGE-immunoblotting. Pour l'immunoprécipitation, les cellules cultivées sont placées dans un tampon de lyse froid et immédiatement homogénéisées sur glace avec un polytron avec plusieurs impulsions. L'homogénat est d'abord centrifugé à 2500 tr/min (20 minutes, 4 °C), puis à nouveau à 14 000 tr/min dans une microcentrifugeuse (10 minutes, 4 °C). Les surnageants (1000 μg de protéines) sont incubés pendant 2 heures à 4 °C avec 15 mL d'anticorps polyclonal anti-EGFR. Après 2 heures, 50 μL de billes d'agarose protéine G plus/protéine A sont ajoutées et incubées sous rotation constante pendant 2 heures à 4 °C. Après lavage avec le tampon de lyse, les billes sont bouillies pendant 2 minutes dans le tampon d'échantillon de Laemmli. Les protéines sont ensuite résolues par SDS-PAGE, transférées sur une membrane d'immobilisation et sondées pendant une nuit avec un anticorps anti-phosphotyrosine conjugué à la peroxydase de raifort (HRP). Les membranes sont développées à l'aide du réactif ECL. La protéine EGFR totale est déterminée en décapant les membranes et en les re-sondant avec des anticorps spécifiques du récepteur. La quantification des bandes est effectuée par densitométrie, à l'aide du logiciel ImageQuant avec un scanner de transmittance laser Molecular Dynamics.
In vivo	Une dose orale unique de 10 mg/kg de Pelitinib (EKB-569) inhibe puissamment la phosphorylation de l'EGFR dans les xénogreffes A431 avec une surexpression de l'EGFR, de 90% en 1 heure et de >50% après 24 heures. L'administration de ce composé à 20 mg/kg/jour inhibe la tumorigenèse chez les souris APC^Min/+ de 87%, ce qui équivaut à l'effet de 2 doses d'EKI-785 (40 mg/kg/jour), ce qui est cohérent avec une plus grande puissance in vivo. Ce produit chimique inhibe sélectivement la signalisation de l'EGFR dans les cellules épithéliales des voies respiratoires in vivo. Dans le modèle murin de remodelage épithélial des voies respiratoires qui est inductible par une infection virale et qui présente un passage tardif mais permanent à une métaplasie des cellules caliciformes, le traitement par ce composé à 20 mg/kg/jour corrige les 3 aspects du remodelage épithélial, en bloquant complètement l'augmentation des cellules ciliées et la diminution des cellules de Clara, et en inhibant significativement la métaplasie des cellules caliciformes.
Références	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Support technique

Instructions de manipulation

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Si vous avez dautres questions, veuillez laisser un message.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
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C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibiteur

Structure chimique

Poids moléculaire: 467.92