Apoptosis Activator 2 Caspase activateur

Apoptosis Activator 2 (20 μM) à une concentration réduite de cyto c augmente la fraction d'Apaf-1 dans l'apoptosome de 1,5 fois à 33 %. Ce composé augmente l'étendue de l'activation de la caspase-3 à un niveau réduit de cyto c et l'activation de la caspase-3 de 4 fois. Il induit fortement l'activation de la caspase-3, le clivage de PARP et la fragmentation de l'ADN, et tue finalement les cellules avec une IC50 de 4 μM. Cet activateur induit l'Apoptosis des cellules PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 et NCI-H23 avec une IC50 de 50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM et 35 μM. Il exerce un effet cytostatique sur la majorité des lignées cellulaires tumorales testées, inhibant la croissance cellulaire de 50-100 % à 10 μM dans 40 des 48 lignées cellulaires testées. [1] Cette substance chimique induit la mort cellulaire en déclenchant la formation d'apoptosomes. Le niveau d'expression d'En1 n'a pas d'influence significative sur les taux de survie des cultures du mésencéphale ventral pour ce composé (-8,1 ± 6,0 %). Le taux de survie n'est pas significativement modifié si les trois autres réactifs sont utilisés (-10,7 ± 4,7 %) pour cet activateur. [2] Ce composé (10 μM) induit l'Apoptosis dans les cellules AGS, comme évalué par l'échelle d'ADN apoptotique et le test Tunel. Il (10 μM) améliore l'induction de l'Apoptosis par les liposomes conjugués anti-TROP2. [3] Le cycloheximide (10 μg/mL) ou le zVAD (50 μM) protège significativement contre la toxicité de cette substance chimique dans les cultures neuronales. Cet activateur (3 μM) entraîne de nombreux neurones avec des noyaux pycnotiques suggérant une mort cellulaire impliquant l'Apoptosis. Le DHT (10 nM) ou l'E2 (10 nM) protège significativement contre la toxicité de ce composé dans les cultures neuronales. [4]

Essai d'Apoptosis acellulaire

Les extraits cytoplasmiques de cellules HeLa sont préparés selon des rapports publiés précédemment. Apoptosis Activator 2 dans du DMSO est distribué dans des plaques de microtitration à 96 puits à une concentration finale de 1 mM (la concentration finale de DMSO est de 1 % vol/vol). À chaque puits, on ajoute 250 μg de protéines totales d'extraits cytoplasmiques dans un tampon HEB (50 mM Hepes, pH 7,4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl), avec 2 mM DTT, 2 μM cyto c et 0,5 μM de substrat DEVD-AFC (Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin) dans un volume total de 150 μL. Les plaques sont incubées à 37 ℃, et la fluorescence est lue dans un lecteur de plaques LJL Biosystems à des intervalles de 10 min.