Name: PHA-767491 HCl
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2742
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Contrôle Qualité

Lot : Pureté : 99.96%

99.96

Cibles apparentées	HSP PD-1/PD-L1 ROCK Wee1 DNA/RNA Synthesis Microtubule Associated Ras KRas Aurora Kinase Casein Kinase
Autre CDK Inhibiteurs	AS2863619 Ro-3306 SEL120 (SEL120-34A) hydrochloride INX-315 Tagtociclib (PF-07104091) PF-07220060 (CDK4/6-IN-6) AZD4573 ON123300 Enitociclib (BAY 1251152) Samuraciclib (ICEC0942) hydrochloride

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires	Type dessai	Concentration	Temps dincubation	Description de lactivité
human SF268 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SF268 cells after 72 hrs, IC50=0.86 μM
human HCT116 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT116 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=0.97 μM
human HCT16 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT16 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human SW403 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW403 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human A2780 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human A2780 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.07 μM
human SW48 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW48 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.2 μM
human MCF7 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human MCF7 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.3 μM
human U2OS cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human U2OS cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.49 μM
human COLO205 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human COLO205 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.5 μM
human OVCAR8 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human OVCAR8 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.56 μM
human L363 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human L363 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NHDF cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NHDF cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NCI-H929 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI-H929 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.8 μM
human SF539 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SF539 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.34 μM
human SW480 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SW480 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.67 μM
human NCI60 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against human NCI60 cells, IC50=3.1 μM
human Jurkat cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human Jurkat cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.2 μM
human HCT15 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT15 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.81 μM
human OPM2 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human OPM2 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=4.5 μM
human HT-29 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HT-29 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=5 μM
human K562 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human K562 cells after 72 hrs, IC50=5.87 μM
U937 cells	Function assay			Inhibition of TNFalpha production in U937 cells, IC50=19 μM
human HeLa cells	Function assay	5 μM	24 h	Induction of apoptosis in human HeLa cells assessed as appearance of PARP at 5 uM after 24 hrs
NHDF	Function assay	5 μM	16 h	Induction of cell cycle arrest in thymidine deficient NHDF assessed as DNA synthesis in S-phase at 5 uM after 16hrs FACS analysis in presence of serum
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire	249.7	Formule	C₁₂H₁₁N₃O.HCl	Stockage (À compter de la date de réception)	3 ans-20°Cpoudre
N° CAS	942425-68-5	Télécharger le SDF		Stockage des solutions mères	1 an-80°Cen solvant 1 mois-20°Cen solvant
Synonymes	CAY10572, NMS 1116354			Smiles	C1CNC(=O)C2=C1NC(=C2)C3=CC=NC=C3.Cl

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 24 mg/mL (96.11 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse	Concentration	Volume	Poids moléculaire
=	×	×

Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo Lot:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 30%PEG300 2 2%Tween80 3 63%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	1.000mg/ml (4.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 20 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 630 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

Dosage : mg/kg Poids moyen des animaux : g Volume de dosage par animal :μL Nombre danimaux :

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH₂O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de lajout précédent, est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Caractéristiques	The first inhibitor that directly affects the mechanisms controlling initiation as opposed to elongation in DNA replication.
Targets/IC₅₀/Ki	Cdc7 (Cell-free assay) 10 nM CDK9 (Cell-free assay) 34 nM GSK-3β (Cell-free assay) 220 nM CDK2 (Cell-free assay) 240 nM CDK1 (Cell-free assay) 250 nM CDK5 (Cell-free assay) 460 nM MK2 (Cell-free assay) 470 nM PLK1 (Cell-free assay) 980 nM
In vitro	Le PHA-767491 présente une sélectivité d'environ 20 fois pour Cdk1, Cdk2 et GSK3-β, une sélectivité de 50 fois pour MK2 et Cdk5 et une sélectivité de 100 fois pour PLK1 et CHK2. Le PHA-767491 inhibe la prolifération cellulaire dans une variété de lignées cellulaires humaines avec des IC50 de 0,86 μM pour SF-268 à 5,87 μM pour K562, et induit significativement l'apoptose de manière p53-indépendante dans presque toutes les lignées cellulaires, contrairement au 5-FU qui ne fonctionne que dans quelques lignées cellulaires. Contrairement aux inhibiteurs actuels de la synthèse de l'ADN, le traitement au PHA-767491 à 5 μM bloque l'initiation de la réplication de l'ADN mais pas la progression de la fourche de réplication, en raison d'une inhibition spécifique de la kinase Cdc7 et de la phosphorylation de Mcm2 au site Ser40 dépendant de Cdc7. Les niveaux de Mcl-1 régulés à la hausse dans les cellules OCI-LY1 et SU-DHL-4 résistantes à l'ABT-737 peuvent être significativement diminués par un traitement au PHA-767491 à 3 μM, probablement en raison de l'inhibition de Cdk9, ce qui conduit à la restauration de la sensibilité à l'ABT-737. L'effet pro-apoptotique direct dépendant des mitochondries du PHA-767491 est également observé lorsqu'il est appliqué à 1 μM dans les cellules de leucémie lymphoïde chronique (LLC) quiescentes par un mécanisme similaire avec des EC50 de 0,34-0,97 μM. Tandis que dans les cellules LLC proliférantes stimulées par CD154 et l'interleukine-4, le traitement au PHA-767491 à 5 μM abolit la synthèse de l'ADN en inhibant Cdc7 plutôt qu'en déclenchant la mort cellulaire.
Essai kinase	Tests kinases in vitro
Essai kinase	L'inhibition de Cdc7 et CDK9 par PHA-767491 (IC50) est déterminée à l'aide de l'essai basé sur l'échangeur d'anions fort (résine Dowex 1-X8, forme formate). Pour chaque enzyme, les valeurs K_m absolues pour l'ATP et le substrat spécifique sont initialement déterminées, et chaque essai est ensuite réalisé à des concentrations optimisées d'ATP/³³P-γ-ATP mix (2K_m) et de substrat (5K_m). L'essai kinase de Cdc7 est effectué dans un tampon contenant 50 mM Hepes pH 7,9, 15 mM MgCl₂, 2 mM β-glycérophosphate, 0,2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³P-γ-ATP mix, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM de Cdc7/Dbf4 recombinant et une concentration croissante de PHA-767491 dans un volume final de 30 μL, et incubé pendant 1 heure à 25 °C. L'essai kinase de CDK9 est effectué en utilisant 50 nM de Cdk9/cyclin T recombinant dans 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³P-γ-ATP mix, 5K_m peptide CDT d'ARN polymérase et une concentration croissante de PHA-767491 dans un volume final de 30 μL, et incubé pendant 1 heure à 25 °C. Après incubation, 150 μL de résine/formate (pH 3,0) sont ajoutés pour arrêter la réaction et capturer le ³³P-γ-ATP non réagi, le séparant ainsi du substrat phosphorylé en solution. Après 1 heure de repos, un volume de 50 μL de surnageant est transféré dans des plaques à 96 puits Optiplate. Après l'ajout de 150 μL de Microscint 40, la radioactivité est comptée dans le TopCount.
In vivo	L'administration de PHA-767491 deux fois par jour pendant 5 jours inhibe significativement la croissance du xénogreffe HL60 de manière dose-dépendante avec un TGI de 50 % et 92 % à des doses de 20 mg/kg et 30 mg/kg, respectivement. Cet effet est également marqué dans les modèles de xénogreffe A2780, Mx-1 et HCT-116 ainsi que dans les carcinomes mammaires, et est corrélé à l'inhibition de Cdc7 et à la phosphorylation subséquemment diminuée de Mcm2 au site Ser40 dépendant de Cdc7
Références	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20197552/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21768328/

Applications

Méthodes	Biomarqueurs	Images	PMID
Western blot	p-MCM2 / CDC7 RNA Pol II / p-RNA Pol II / Caspase-3 / PARP / Mcl-1 / XIAP / Bcl-xL / Bcl-2 / NOXA		24902048

Support technique

Instructions de manipulation

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Si vous avez dautres questions, veuillez laisser un message.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

PHA-767491 HCl CDK inhibiteur

Structure chimique

Poids moléculaire: 249.7